狂犬病病毒抗原检测试剂盒——狂犬病疫苗体外效力评价新方法
狂犬病是一种致命性人兽共患病，疫苗接种是预防狂犬病的主要手段。而疫苗的有效性，则直接依赖于其抗原含量与质量。云菱生物开发的狂犬病病毒抗原检测试剂盒，提供了一种基于G 蛋白定量检测的疫苗体外效力评价方法，适用于不同生产商、病毒株和细胞系生产的狂犬病疫苗，为推动疫苗质量控制与研发提供了重要工具。
1. 预期用途
本试剂盒适用于不同生产商、病毒株和培养细胞系生产的狂犬病疫苗的G蛋白含量的测定。
G蛋白是狂犬病病毒表面的一种关键糖蛋白，作为诱导机体产生中和抗体的保护性抗原，其含量可直接反映疫苗的免疫原性。因此，通过测定G蛋白实现对抗原含量的评估，已成为衡量狂犬病疫苗有效性的关键指标之一，也与疫苗的实际免疫效果密切相关。
图1 第二十四界中国生物制品大会产品展
2. 应用场景
本试剂盒适用于以下环节：
Ø 疫苗临床前研究：抗原完整性检测、抗原回收率检测；
Ø 生产质量控制：收获液、浓缩液、灭活液、原液抗原含量的质控监测；
Ø 疫苗体外相对效力：ELISA 评估的G蛋白含量与NIH试验之间存在良好的相关性[1-2]，因此该方法适用于体外评价疫苗效力，可以补充甚至部分取代NIH试验。
狂犬病疫苗从研发到上市设计的环节包括临床前研究、临床试验审批（IND）、临床试验I期、临床试验Ⅱ期、临床试验Ⅲ期、新药申请（NDA）、新药批准等。
图2 一支疫苗的诞生
国内主要使用的狂犬病疫苗为人二倍体疫苗和Vero细胞纯化疫苗[3]（5种毒株，2种自主专利）。以国内较为成熟的Vero细胞狂犬疫苗为例，对疫苗生产工艺流程进行介绍。
（1） Vero细胞复苏及扩增传代；
（2） 病毒培养、接种：将人用狂犬疫苗减毒株稀释到适宜浓度后，接种于工作代Vero细胞上；
（3） 病毒收获：接种后的Vero细胞经培养，更换维持液后，进行多次病毒液收获；
（4） 病毒收获液合并、浓缩及灭活：将检定合格的同一细胞批生产的病毒收获液合并，经超滤或其他方法浓缩至规定的蛋白质含量范围后灭活；
（5） 病毒纯化：完全灭活后的病毒液经柱色谱法等方法进行纯化，调节PH值并加入人血白蛋白等稳定剂制备为原液；
（6） 半成品制备：将原液按照要求的同一蛋白含量或抗原含量进行配制，且总蛋白含量应不高于80μg/剂，加入适宜的稳定剂即为半成品；
（7） 分装、包装成品。
图3 狂犬疫苗制备工艺流程图
4. 试剂盒核心优势
本公司推出的狂犬病病毒抗原检测试剂盒具有以下优势[4]：
l 适用范围广：可定量检测来自不同生产商、病毒株和培养细胞系生产的狂犬病疫苗的G蛋白含量，检测结果灵敏度相当，变异程度小；
l 灵敏度高：以WHO抗原标准品为参考，最低检测限为0.003125IU/ml，灵敏度明显高于其他市售的G蛋白含量定量试剂盒；
l 特异性强：仅识别狂犬病病毒G蛋白，不受其他成分干扰；
l 精密度好：高浓度及低浓度标准试剂的日内和日间变异系数（CV）均在15%以内；
l 操作简便：无需动物试验、省时省力，操作简单且较为安全，伦理审查遵循“3R“原则。
参考文献：
[1]. LIU Y X, HUANG H, SHU-YUN L I. Papid Quantitative Assay of Rabies Post vaccination Antibody by ELISA [J]. CHINESE JOURNAL OF VACCINES AND IMMUNIZATION, 1988;3:40-43.
[2]. WOOD J M, SCHILD G C, NEWMAN R W, et al. An improved single-radial immunodiffusion technique for the assay of influenza haemagglutinin antigen: application for potency determinations of inactivated whole virus and subunit vaccines [J]. J Biol Stand, 1977, 5(3): 43-42.
[3].王传林. 狂犬病疫苗研究进展 [J] . 中华实验和临床病毒学杂志, 2018, 32(3) : 323-327. DOI: 10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2018.03.024.
[4]. 王佑春,黄维金,蔡美娜,李玉华,曹守春,谢婧书,刘玉翠,杨毅,乔杉,任晋凯,史巧云,张晓磊. 抗狂犬病毒的抗体及其应用[P].中国专利：CN115925908A, 2023-04-07.
